वैज्ञानिकों को आरएनए को डीएनए में बदलना पड़ता है। इसी प्रक्रिया को 'रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन' कहा जाता है। RNA का DNA में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन इसलिए किय
आरटी-पीसीआर टेस्ट क्या है और यह कैसे किया जाता है ?
कोरोनावायरस महामारी तेजी से दुनिया भर में बढ़ रही है, और विश्व स्तर पर COVID-19 के मामलों की संख्या बढ़ रही है। इसके कारण COVID-19 जैसे RT-PCR परीक्षण, TruNat परीक्षण, एंटीजन टेस्ट, रैपिड एंटीबॉडी परीक्षण और अन्य का पता लगाने के लिए उपयोग की जाने वाली चिकित्सा की संख्या में वृद्धि हुई है। एफडीए, खाद्य और कृषि संगठन संयुक्त राष्ट्र (एफएओ) जैसे नियामक संस्थाओ के अनुसार, आरटी-पीसीआर वर्तमान कोरोनावायरस महामारी के लिए सबसे सटीक प्रयोगशाला परीक्षण विधि में से एक है।
इसके अतिरिक्त, एक व्यक्ति में वायरस की उपस्थिति का पता लगाने के लिए अन्य परीक्षण भी हैं। इस प्रकार, लोगों की बढ़ती संख्या के साथ नावेल रोग से संक्रमित होने के साथ-साथ परीक्षण करने वाले लोगों की संख्या में वृद्धि हुई है। नई दिल्ली सहित विभिन्न राज्यों में यह मुफ़्त है और परीक्षण के लिए किसी प्रिस्क्रिप्शन की आवश्यकता नहीं है।
RT-PCR टेस्ट करवाने के लिए क्या आवश्यक है ?
वर्तमान कोरोनावायरस महामारी RT-PCR टेस्ट के कारण एक चिकित्सा शब्दावली अस्तित्व में आई है। आरटी-पीसीआर परीक्षण एक प्रयोगशाला परीक्षण है जो वायरस का पता लगाने के लिए डीएनए में आरएनए के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को जोड़ती है। COVID-19 के लिए RT-PCR टेस्ट सबसे महत्वपूर्ण टेस्ट है; हालाँकि, इस परीक्षण में समय लगता है और यह महंगा है क्योंकि इसमें एक विस्तृत किट है। एक आरटी-पीसीआर परीक्षण वायरस का पता लगाने के लिए नाक या गले के स्वैब का उपयोग करता है।
इसके अलावा, केवल प्रशिक्षित पेशेवर जिन्हें आरटी-पीसीआर किट के उपयोग के लिए निर्देश दिया जाता है, वे आरटी-पीसीआर परीक्षण कर सकते हैं। आरटी-पीसीआर को एक पूर्ण सेट-अप की आवश्यकता होती है, जिसमें प्रशिक्षित चिकित्सकों, प्रयोगशाला और आरटी-पीसीआर मशीन का विश्लेषण करना शामिल होता है।
RT-PCR टेस्ट में COVID -19 का पता कैसे लगाया जाता है ?
RT-PCR टेस्ट देश भर में COVID-19 की दूसरी लहर के साथ संक्रमित व्यक्तियों के समय पर उपचार में मददगार है। हालांकि, कई लोगों ने पिछले वर्ष में RT-PCR टेस्ट किया है, लेकिन शायद ही लोग इसके पीछे के विज्ञान को जानते और समझते है! आरटी-पीआरसी टेस्ट क्या है? RT-PCR क्या है और यह वास्तव में COVID-19 SARS-CoV-2 का पता लगाने के लिए परीक्षण कैसे करता है। आइए इसके पीछे के विज्ञान को डिकोड करें।
RT-PCR टेस्ट क्या है ?
वैज्ञानिक रूप से कहें तो, रियल-टाइम RT-PCR एक नवीन परमाणु-व्युत्पन्न परीक्षण विधि है, जिसका व्यापक रूप से वायरस सहित किसी भी पैथोजन में विशिष्ट जेनेटिक मटीरियल की उपस्थिति का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। अपने शुरुआती चरण के दौरान,जेनेटिक मटीरियल का पता लगाने के लिए रेडियोएक्टिव आइसोटोप मार्कर विधि परीक्षण में शामिल थी। रेडियोएक्टिव आइसोटोप का उपयोग धीमा और बोझिल था क्योंकि परीक्षण के परिणाम प्रक्रिया के अंत में ही उपलब्ध होते थे।
हालांकि,आने वाले वर्षो में ,आगे की तकनीक विकसित हुई है और रेडियोएक्टिव आइसोटोप मार्करों को अब विशेष मार्करों के साथ बदल दिया गया, जो ज्यादातर मामलों में फ्लोरोसेंट डाई हैं, जो लगभग तुरंत ही परिणाम देता है, प्रक्रिया के चलने के दौरान ही।
जब वायरस के परीक्षण की बात आती है, तो RT-PCR को हमारे लिए उपलब्ध सर्वोत्तम तरीकों में से एक माना जाता है। COVID-19 के SARS-CoV-2 वायरस के अलावा, यह परीक्षण व्यापक रूप से इबोला वायरस और जीका वायरस सहित अन्य वायरस आधारित बीमारी के परीक्षण के लिए भी किया जाता है।
वायरस और इसका जेनेटिक मटेरियल क्या है ?
यह समझने के लिए आगे बढ़ने से पहले कि RT-PCR टेस्ट SARS-CoV-2 वायरस का पता लगाने के लिए कैसे काम करता है, यह कुछ एलिमेंट्री स्कूल-स्तरीय बायोलॉजी को रिफ्रेश करने का समय है और यह जानना कि वास्तव में वायरस क्या है और इसकी संरचना क्या है। एक वायरस की व्याख्या करने वाली सबसे सरल परिभाषा यह है कि “एक वायरस मॉलिक्यूलर एनवेलप से घिरा जेनेटिक मटेरियल का एक माइक्रोस्कोपिक पैकेज है। यह जेनेटिक मटेरियल या तो डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड (डीएनए) या राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) हो सकती है। ”
अब, एक वायरस में मूल रूप से एक प्रोटीन शेल होता है जिसके अंदर डीएनए या आरएनए जेनेटिक मटेरियल की सूक्ष्म मात्रा होती है। किसी भी वायरस के तौर-तरीकों में होस्ट (मानव शरीर) में प्रवेश करना, प्रोटीन शेल की मदद से खुद को होस्ट सेल से जोड़ना और फिर सेल के अंदर जेनेटिक मटेरियल को छोड़ना शामिल है, जहां पर ये रेप्लिकेट करता है। रेप्लिकेटेड वायरस तब हमारे शरीर के अन्य हैल्थी सेल्स को संक्रमित करता है और हमें बीमार कर देता है।
हमारी चर्चा के लिए आवश्यक जीवविज्ञान पाठ आरएनए और डीएनए के बारे में है। डीएनए का मतलब डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक होता है, जो की एक डबल स्ट्रेन्डेड मॉलिक्यूल है जो जेनेटिक मटेरियल या खुद को विकसित करने का ब्लूप्रिंट रखता है। ज्यादातर, सभी जीव डीएनए अणु रखते हैं। दूसरी ओर, आरएनए का मतलब राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) होता है, जो सिंगल स्ट्रैंडेड अणु होता है, जो जेनेटिक कोड के कुछ हिस्सों को ,होस्ट बॉडी के प्रोटीन में ट्रांसमिट और प्रसारित करता है।
SARS-CoV-2 वायरस आरएनए आधारित वायरस है और इसलिए यह स्वस्थ कोशिकाओं (सेल्स) में घुसपैठ करता है और उनका उपयोग खुद को मल्टीप्लाई और जीवित रहने के लिए करता है। सेल के अंदर , COVID-19 वायरस अपने स्वयं के जेनेटिक कोड RNA का उपयोग करता है - कोशिकाओं (सेल्स ) को रिप्रोग्रामम और नियंत्रित करने के लिए, उन्हें वायरस बनाने वाली फैक्ट्री में बदल देता है।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन क्या है ?
RT-PCR टेस्ट में RT का मतलब रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन है और यह SARS-CoV-2 वायरस परीक्षण प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण कदम है, जो कि एक आरएनए आधारित वायरस है। मानव शरीर में COVID-19 वायरस की उपस्थिति का पता लगाने के लिए, वैज्ञानिकों को आरएनए को डीएनए में बदलना पड़ता है। इसी प्रक्रिया को 'रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन' कहा जाता है। RNA का DNA में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन इसलिए किया जाता है क्योंकि प्रयोगशाला स्थितियों में, केवल डीएनए को कॉपी या एम्प्लीफाई किया जा सकता है, जो कि COVID-19 वायरस का पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण है।
मानव शरीर में वायरस का पता लगाने के लिए, प्रयोगशालाएं, वायरल हुए डीएनए के एक विशिष्ट हिस्से को सैकड़ों हजारों बार एम्प्लीफाई करती है। ऐसा इसलिए किया जाता है ताकि हमें वायरस आरएनए के एक छोटे छोटे ट्रेसेस की तलाश न करनी पड़े, बल्कि इसके बजाय संक्रमित डीएनए स्ट्रैंड की बड़ी मात्रा की पहचान की जाती है, जो वायरस का जल्द पता लगाने में मदद करता है।
RT-PCR टेस्ट COVID -19 वायरस का कैसे पता लगाता है ?
RTS-PCR टेस्ट जो SARS-CoV-2 वायरस यानी COVID-19 वायरस का पता लगाने के लिए किया जाता है, इसमें निम्न चरण शामिल हैं:
सैंपल कलेक्शन: मानव शरीर में वायरस की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, शरीर के उन हिस्सों से एक सैंपल एकत्र किया जाता है जहां वायरस इकट्ठा होता है। SARS-CoV-2 के मामले में, यह व्यक्ति की नाक या गला है। इसलिए, इन नमूनों को स्वैब प्रोब का उपयोग करके नाक या गले से एकत्र किया जाता है।
सैंपल रिफाईनमेंट : दूसरे चरण में, एकत्रित सैंपल केमिकल ट्रीटमेंट से गुजरता है और किसी भी अन्य पदार्थ जैसे कि प्रोटीन और वसा से से अलग होने के लिए रिफाइंड किया जाता है। ऐसा इसलिए किया जाता है ताकि सैंपल में केवल आरएनए जेनेटिक मटेरियल उपस्थित हो, जिसे परीक्षणों के लिए निकाला जा सके। यह निकाला गया आरएनए व्यक्ति के अपने जेनेटिक मटेरियल का मिश्रण है।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन: जैसा कि ऊपर बताया गया है, प्रयोगशालाओं में, हम आरएनए को एम्प्लिफाई या कॉपी नहीं कर सकते हैं, इसलिए, एक विशिष्ट एंजाइम का उपयोग करके इसे डीएनए का एक रूप देने के लिए रिवर्स ट्रांसक्राइब किया जाता है। इस प्रक्रिया के दौरान, प्रयोगशालाओं में डीएनए के अतिरिक्त छोटे फ़्रैगमेन्ट्स भी जोड़े जाते हैं जो ट्रांसक्राइब वायरल डीएनए के विशिष्ट भागों की कमी को पूरा करने वाले होते हैं। यदि वायरस होस्ट बॉडी के सैंपल में मौजूद है, तो यह वायरल डीएनए के टारगेट सेक्शन से खुद को अटैच करेगा।
RT-PCR टेस्टिंग मशीन: अब, इस नमूने को RT-PCR मशीन में रखा जाता है, जो विशिष्ट केमिकल रिएक्शन को ट्रिगर करने के लिए टेम्परेचर फ्लक्चुएशन के कई साइकिल से गुजरता है यानी मूल रूप से सैंपल को गर्म और ठंडा करता है। इस प्रक्रिया के दौरान, वायरल डीएनए के टारगेट सेक्शन की आईडेंटिकल कॉपी बनायी जाती है, और प्रत्येक नयी साइकिल ,आईडेंटिकल कॉपी की उपस्थिति को दोगुना करता है। आमतौर पर, प्रत्येक आरटी-पीसीआर परीक्षण के लिए 35 साइकिल दोहराई जाती हैं, जिसका अर्थ है कि प्रक्रिया के अंत तक, वायरल डीएनए के सेक्शन की लगभग 35 बिलियन नई कॉपीयां।
फ्लोरोसेंट डाई के माध्यम से जांच: वायरल डीएनए की नई कॉपीयों की संख्या सैंपल में इकट्ठा होती है, मार्कर लेबल डीएनए स्ट्रैंड्स से जुड़ते हैं और फ्लोरोसेंट डाई जारी करते हैं। कंप्यूटर परीक्षण मशीन प्रत्येक साइकिल के बाद सैंपल में प्रतिदीप्ति (फ्लुओरोसेंस ) की मात्रा को ट्रैक करता है और एक निश्चित सीमा (थ्रेशोल्ड) पार हो जाने के बाद, यह वायरस की उपस्थिति की पुष्टि करता है। संक्रमण की गंभीरता का निर्धारण इस बात के आधार पर किया जा सकता है कि सेट थ्रेशोल्ड को पार करने के लिए मशीन ने कितने चक्र लिए।
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